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懸浮細(xì)胞的免疫熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)

更新時(shí)間:2022-05-07      點(diǎn)擊次數(shù):1610

免疫熒光標(biāo)記技術(shù)(immunofluorescence technique)是將已知的抗體或抗原分子標(biāo)記上熒光素,當(dāng)與其相對(duì)應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時(shí),在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素,在熒光顯微鏡下就可以看見(jiàn)發(fā)出熒光的抗原抗體結(jié)合部位,檢測(cè)出抗原或抗體。


實(shí)驗(yàn)材料    

     

懸浮細(xì)胞


試劑、試劑盒     

    

多聚-L-賴氨酸


儀器、耗材     


離心機(jī)培養(yǎng)箱


實(shí)驗(yàn)步驟        


1.  細(xì)胞在冰浴中冷卻,然后用臺(tái)式離心機(jī)于4℃以800 g 離心5 min,吸去培養(yǎng)液并以4PBS重懸細(xì)胞。

 

2.  離心吸去PBS,以1~2 ml 2%PFA固定液,或2%PFA固定液/0.1% Triton X-100重懸細(xì)胞,置冰上固定30 min

 

3.  離心、吸去固定液,用15 ml 4 PBS重懸細(xì)胞,放5 min 后,用PBS再次洗滌細(xì)胞。

 

4.  稀釋的第一抗體于4℃用微量離心機(jī)以13 500 g 離心2 min250 μ抗體足夠用于5×106細(xì)胞。

 

5.  離心細(xì)胞,吸去PBS,重懸細(xì)胞于第一抗體中,置4℃溫育1 h

 

6.  4 PBS稀釋細(xì)胞和抗體至15 ml

 

7.  離心,吸去PBS,以4 PBS重懸細(xì)胞,重復(fù)1次。

 

8.  第二抗體4℃用微量離心機(jī)以13 500 g 離心2 min5×106細(xì)胞用250 μ抗體足夠。

 

9.  吸去PBS,以第二抗體重懸細(xì)胞,4℃溫育1 h,重復(fù)步驟6及步驟7

 

10.  除非立即觀察細(xì)胞,否則在進(jìn)行細(xì)胞濃縮的下一步操作之前應(yīng)以鋁萡包裹離心管并冷藏。


11.  離心細(xì)胞并以少量PBS重懸(勿用水),將細(xì)胞懸液滴于多聚-L-賴氨酸覆層的載玻片上,加上蓋玻片,盡可能馬上觀察結(jié)果。


此文轉(zhuǎn)載:丁香通


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